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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
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Data corrente: |
06/02/2018 |
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Data da última atualização: |
06/02/2018 |
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Tipo da produção científica: |
Orientação de Tese de Pós-Graduação |
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Autoria: |
GONÇALVES, A. N. D. |
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Afiliação: |
Aline Najara Domingos Gonçalves. |
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Título: |
Desenvolvimento de um ensaio imunoenzimático (ELISA) pra diagnóstico de Linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. |
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Ano de publicação: |
2017 |
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Fonte/Imprenta: |
Campo Grande, MS: Programa de Pós-graduação em ciência Animal/Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, 2017. |
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Páginas: |
67 f. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Tese apresentada à Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, como requisito à obtenção do título de Doutora em Ciência Animal. Área de concentração: Saúde Animal. Orientadora: Grácia Maria Soares Rosinha - Embrapa Gado de Corte |
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Conteúdo: |
A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e que acomete ovinos e caprinos. Esta doença é caracterizada por lesões purulentas e caseosas nos gânglios linfáticos e, ocasionalmente, pulmões, baço, rins e fígado. O diagnóstico da LC, normalmente, é baseado em sinais clínicos, no entanto, o teste padrão ouro é o isolamento microbiológico, realizado a partir do material purulento dos abcessos. Faz-se necessário um método que seja capaz de diagnosticar animais doentes, com presença ou não de abcessos externos. Neste contexto, visto os esforços para identificar e controlar a doença, objetivou-se, neste estudo, avaliar o potencial da proteína XA1 recombinante (XA1r) de C. pseudotuberculosis como candidata a compor um teste sorológico do tipo ELISA indireto, para o diagnóstico de linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A sequência do gene xa1, que codifica a porção hidrofílica da proteína XA1, foi selecionada com o auxílio do programa Protean (DNASTAR®). Esta sequência e a construção do plasmídeo de expressão gênica foram sinteticamente confeccionadas pela empresa de biotecnologia Genone Biotechnologies. O gene xa1 foi clonado em plasmídeo de expressão em procariotos pET-47b(+). O plasmídeo pet47Bxa1 foi introduzido em célula quimicamente competente de E. coli Rosetta-Gami e realizada a expressão gênica XA1r foi purificada por cromatografia de afinidade, em resina metálica com a coluna de agarose níquel, dialisada em PBS, quantificada pelo método de Lowry e armazenada a -20ºC. Posteriormente, um teste de ELISA indireto foi padronizado com o uso desta proteína como antígeno sistemático (n= 23), assintomáticos (n= 10) e histórico de LC (n= 10). O banco formado com soros de caprinos foi composto por soros positivos (n=29), negativos (n=19), soros de animais de um rebanho com histórico de LC (n= 15) e outros soros de caprinos com sinais clínicos da doença (n= 29), totalizando 92 soros. O ponto de corte foi feito por meio da curva ROC. O teste de ELISA indireto foi capaz de discriminar animais positivos e negativos, com sensibilidade de 90,9% e especificidade de 72,2%. Foram identificados cinco animais como falso-positivos e três foram considerados falso-negativos. Quando testados os animais dos três grupos - testes assintomáticos, histórico de LC e controle sistemático -, 90,7% foi considerado positivo para LC. O teste de ELISA indireto para diagnóstico de LC em caprinos apresentou sensibilidade de 96,6% e especificidade de 67,2%. O teste de ELISA apresentou um animal falso-negativo e seis falso-positivos. A associação do teste de ELISA indireto, proposto a exames clínicos, foi capaz de diagnosticar como positivos 96,55% dos animais que possuíam sinal clínico da doença, mostrando assim, o potencial da proteína XA1r no reconhecimento de anticorpos contra C. pseudotuberculosis. Os resultados demonstram a potencialidade da proteína XA1r, quando utilizada como antígeno em teste ELISA indireto. Deste modo, este imunoensaio poderá ser utilizado para o diagnóstico de ovinos e caprinos com LC, auxiliando no controle da doença. MenosA Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e que acomete ovinos e caprinos. Esta doença é caracterizada por lesões purulentas e caseosas nos gânglios linfáticos e, ocasionalmente, pulmões, baço, rins e fígado. O diagnóstico da LC, normalmente, é baseado em sinais clínicos, no entanto, o teste padrão ouro é o isolamento microbiológico, realizado a partir do material purulento dos abcessos. Faz-se necessário um método que seja capaz de diagnosticar animais doentes, com presença ou não de abcessos externos. Neste contexto, visto os esforços para identificar e controlar a doença, objetivou-se, neste estudo, avaliar o potencial da proteína XA1 recombinante (XA1r) de C. pseudotuberculosis como candidata a compor um teste sorológico do tipo ELISA indireto, para o diagnóstico de linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A sequência do gene xa1, que codifica a porção hidrofílica da proteína XA1, foi selecionada com o auxílio do programa Protean (DNASTAR®). Esta sequência e a construção do plasmídeo de expressão gênica foram sinteticamente confeccionadas pela empresa de biotecnologia Genone Biotechnologies. O gene xa1 foi clonado em plasmídeo de expressão em procariotos pET-47b(+). O plasmídeo pet47Bxa1 foi introduzido em célula quimicamente competente de E. coli Rosetta-Gami e realizada a expressão gênica XA1r foi purificada por cromatografia de afinidade, em resina metálica com a coluna de agarose níquel, diali... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Lymphadenitis Caseosa. |
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Thesagro: |
Corynebacterium Pseudotuberculosis. |
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Thesaurus Nal: |
Enzyme-linked immunosorbent assay; Goats; Sheep. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/172260/1/Desenvolvimento-de-um-ensaio-imunoenzimatico-Elisa.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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| 3. |  | CORREIA, D.; GONÇALVES, A. N. Macronutrientes, aspectos nutricionais e bioquímicos no crescimento de brotações de Eucalyptus grandis in vitro. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FLORICULTURA E PLANTAS ORNAMENTAIS, 16., CONGRESSO BRASILEIRO DE CULTURA DE TECIDOS DE PLANTAS, 3., SIMPÓSIO DE PLANTAS ORNAMENTAIS NATIVAS, 2007, Goiânia, GO. Resumos...Goiânia: Universidade Federal de Goiás, 2007.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso | Circulação/Nível: -- - -- |
| Biblioteca(s): Embrapa Agroindústria Tropical. |
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| 8. | | DINIZ, J. D. N.; GONÇALVES, A. N.; HERNANDEZ, F. F. F.; TORRES, A. C. Absorção de macronutrientes por explantes de bananeira in vitro. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, DF, v. 34, n. 7, p. 1201-09, jul. 1999 Titulo em inglês: Macronutrient absorption by banana explants in vitro.| Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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| 10. | | BERTOLOTI, G.; HIGA, A. R.; MORA, A. L.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Aplicação de citocinina e fungicidas na enxertia de Eucalyptus urophylla S.T. Blake e E. dunnii Maiden, executados por borbulhia em janela aberta e garfagem em fenda cheia. Silvicultura, SÃo Paulo, v. 8, n. 32, p. 749-751, 1983. Edição dos anais do Simpósio IUFRO em Melhoramento Genético e Produtividade de Espécies Florestais de Rápido Crescimento. Fast Growing Trees.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 11. | | DRUMOND, M. A.; POGGIANI, F.; GONCALVES, A. N.; LEITE, H. G. Avaliacao da produtividade e da area foliar em plantacoes puras e mistas de Liquidambar styraciflua e Pinus caribaea var. hondurensis. Revista Arvore, Viçosa, MG, v. 20, n. 2, p. 155-160, 1996.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: Nacional - B |
| Biblioteca(s): Embrapa Semiárido. |
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| 12. | | HIGA, A. R.; MORA, A. L.; BERTOLOTI, G.; ODA, S.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Propagação vegetativa de prognêies de Eucalyptus urophylla S.T. Blake por borbulhia em janela aberta. Silvicultura, São Paulo, v. 8, n. 32, p. 794-795, 1983. Edição dos anais do Simpósio IUFRO em Melhoramento Genético e Produtividade de Espécies Florestais de Rápido Crescimento. Fast Growing Trees.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 14. | | HIGA, A. R.; MORA, A. L.; BERTOLOTI, G.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Sobrevivência de clones de Eucalyptus urophylla S.T. Blake em bancos clonais instalados em Piracicaba (SP) e Casa branca (SP). Silvicultura, São Paulo, v. 8, n. 32, p. 796-797, 1983. Edição dos anais do Simpósio IUFRO em Melhoramento Genético e Produtividade de Espécies Florestais de Rápido Crescimento. Fast Growing Trees.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 17. | | BERTOLOTI, G.; MORA, A. L.; HIGA, A. R.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Efeito do armazenamento do material vegetativo na enxertia de Eucalyptus grandis Hill ex Maiden. Silvicultura, São Paulo, v. 8, n. 32, p. 752-753, 1983.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 18. | | HIGA, A. R.; MORA, A. L.; BERTOLOTI, G.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Efeito de procedencia em enxertia de Eucalyptus dunnii Maiden por garfagem em fenda cheia. Silvicultura, São Paulo, v. 8, n. 32, p. 793-794, 1983.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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| 19. | | BERTOLOTI, G.; MORA, A. L.; HIGA, A. R.; GONÇALVES, A. N.; FERREIRA, M. Enxertia de Eucalyptus urophylla S.T. Blake pelos métodos garfagem em fenda cheia e borbulhia em janela aberta. Silvicultura, SÃo Paulo, v. 8, n. 32, p. 755-756, 1983. Edição dos anais do Simpósio IUFRO em Melhoramento Genético e Produtividade de Espécies Florestais de Rápido Crescimento. Fast Growing Trees.| Biblioteca(s): Embrapa Florestas. |
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